酶聯免疫試劑盒的使用和注意事項
更新時間：2017-06-30 點擊次數：2070
ELISA（酶聯免疫吸附試驗，
酶聯免疫試劑盒）是酶免疫測定技術中應用zui廣的技術。其基本方法是將已知的抗原或抗體吸附在固相載體 ( 聚苯乙烯微量反應板 ) 表面，使酶標記的抗原抗體反應在固相表面進行，用洗滌法將液相中的游離成分洗除。
酶聯免疫試劑盒的操作使用：
1、加入稀釋好后的標準品50ul于反應孔、加入待測樣品50ul于反應孔內。立即加入50ul的生物素標記的抗體。蓋上膜板，輕輕振蕩混勻，37℃溫育1小時。
2、甩去孔內液體，每孔加滿洗滌液，振蕩30秒，甩去洗滌液，用吸水紙拍干。重復此操作3次。如果用洗板機洗滌，洗滌次數增加一次。
3、每孔加入80ul的親和鏈酶素-HRP，輕輕振蕩混勻，37℃溫育30分鐘。
甩去孔內液體，每孔加滿洗滌液，振蕩30秒，甩去洗滌液，用吸水紙拍干。重復此操作3次。如果用洗板機洗滌，洗滌次數增加一次。
4、酶聯免疫試劑盒每孔加入底物A、B各50ul，輕輕振蕩混勻，37℃溫育10分鐘。避免光照。
5、取出酶標板，迅速加入50ul終止液，加入終止液后應立即測定結果。
6、在450nm波長處測定各孔的OD值。
為保證實驗質量，使用酶聯免疫試劑盒時需注意：
（1）合理安排檢測量，以免反應板過多造成洗板等待時間長。
（2）顯色劑盡量在臨用前配制，堅持不用過期顯色劑，肉眼可見淺藍色的TMB顯色劑不用。
（3）加樣時保持顯色劑不外流;A、B液應避免接觸金屬器械。加終止液時應避免產生氣泡。
（4）加酶試劑后用吸水紙在酶標板表面輕拭吸干。
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